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你好请问大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)培养过程中
时间:2020-02-25 15:59

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  对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml,按此比例进行消化,(根据经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入完全培养基后继续培养或实验。

  一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度可先离心1000rpm,5min后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。

  半贴壁细胞换液时轻一些,且不应用力吹洗,往往在传代时消化时间短,豪利777官网。一般半分钟至1分钟左右。完全培养液成分、ph等应适应该种细胞生长(培养液很重要)。传代吹打时应轻柔,镜下观察多数分散有少数三五细胞成团已即可。传代培养过程中前6-24h(细胞种类而定)左右应尽量避免观察晃动培养瓶。刚培养的细胞可以半量换液,不过如果观察培养液中死细胞较多应及时换液。